(1)3α,7α-二乙酰膽酸甲酯的制備：
    取無(wú)水甲醇36ml，通入1g干燥氯化氫氣體，加膽酸12g，攪拌，加熱回流20-30min，室溫放置數(shù)小時(shí)后析出晶體，冷凍，過(guò)濾，用乙醚洗滌，干燥，得膽酸甲酯。取膽酸甲酯2g，加苯9.6ml，加吡啶2.4ml，加乙酐2.4ml，振搖10-15min，室溫放置20h，將反應(yīng)液倒入100ml水中，除去苯層，反復(fù)用蒸餾水洗滌，回收溶劑，固體殘?jiān)��?a href="http://m.2765yunsong.cn/chemistry/92062-35-6.htm" target="_blank">石油醚洗滌1次，用甲醇-水溶液重結(jié)晶，得3α,7α-二乙酰膽酸甲酯。

    膽酸→膽酸甲酯→3α,7α-二乙酰膽酸甲酯

    (2)鵝去氧膽酸的制備：
    取二乙酰膽酸甲酯1.5g，加乙酸24ml，加鉻酸鉀溶液(取鉻酸鉀0.76g溶于1.8ml水中)，加熱至40℃，反應(yīng)8h，加水120ml，振搖片刻，放置12h，過(guò)濾，用蒸餾水洗至中性，干燥，得3α,7α-二乙酰氧基-12-酮基膽烷酸甲酯，簡(jiǎn)稱12-酮。取12-酮15g，加二乙二醇醚150ml，加80%水合肼溶液15ml，加氫氧化鉀15g，加熱至30℃回流15h，升溫至195-200℃，回流2.5h，升溫至217℃反應(yīng)片刻，冷卻至190℃，加水合肼溶液0.7ml，在3h內(nèi)由215℃升溫至220℃，冷卻，加蒸餾水600ml，加10%硫酸調(diào)pH3，析出結(jié)晶，過(guò)濾，水洗至中性，加乙酸乙酯，棄去水層，有機(jī)層用水洗1-2次，減壓蒸餾，得白色3α,7α-二羥基膽烷酸，即鵝去氧膽酸。

    3α,7α-二乙酰膽酸甲酯→3α,7α-二乙酰氧基-12-酮基膽烷酸甲酯→3α,7α-二羥基膽烷酸(鵝去氧膽酸)

    (3)本品精品的制備：
    取鵝去氧膽酸2g，加100ml乙酸，加乙酸鉀20g，振搖溶解，加鉻酸鉀1.5g(溶于10ml水中)，室溫放置過(guò)夜，加水200ml，析出結(jié)晶，過(guò)濾，水洗，干燥，得3α-羥基-7-酮基膽烷酸。取3α-羥基-7-酮基膽烷酸4g，加正丁醇100ml，加熱至約115℃，分次加入金屬鈉8g，逐漸有白色漿狀物析出，繼續(xù)反應(yīng)30min，加水120ml，攪拌升溫溶解透明，減壓蒸去有機(jī)層，殘?jiān)�加�?00ml，溶解，過(guò)濾，濾液加10%硫酸調(diào)pH3，有白色絮狀物沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，加乙酸乙酯洗滌，稀乙醇結(jié)晶，得3α,7β-二羥基膽烷酸，即本品精品。

    鵝去氧膽酸[鉻酸鉀](méi)→3α-羥基-7-酮基膽酸[金屬鈉，115℃]→3α,7β-二羥基膽烷酸(本品)

    (二)方法二：
    以豬膽鹽或豬膽汁為原料。

    利用薄層層析法從豬膽鹽或豬膽汁中，分離出本品。豬膽鹽中含有游離型和結(jié)合型的UDCA，其含量約30%；豬膽汁中含有結(jié)合型UDCA，含量約0.6%。

2.熊去氧膽酸(128-13-2)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：
    中國(guó)藥典2000年版
    指標(biāo)名稱                                指標(biāo)
    含量(C₂₄H₄₀O₄)/%                      ≥98.5
    熔點(diǎn)/℃                             200～204
    比旋度                     ＋59.0°～＋62.0°
    異臭                                      無(wú)
    氯化物/%                             ≤0.020
    硫酸鹽/%                             ≤0.050
    干燥失重/%                             ≤1.0
    熾灼殘?jiān)?%                             ≤0.2
    鋇鹽                                      無(wú)
    重金屬                        ≤百萬(wàn)分之二十
    砷鹽/%                              ≤0.0002

3.制劑：
    片劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下。

    中國(guó)藥典2000年版
    指標(biāo)名稱                                    指標(biāo)
    含量(C₂₄H₄₀O₄)/%           為標(biāo)示量的95.0～105.0
    檢查                        符合片劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定

4.藥理作用和臨床作用：
　　長(zhǎng)期服用本藥可增加膽汁酸分泌，并是膽汁成分改變，降低膽汁中膽固醇及膽固醇脂，有利于膽結(jié)石中的膽固醇逐漸溶解，用于不宜手術(shù)治療的膽固醇結(jié)石，但不能溶解膽色素結(jié)石、混合結(jié)石及不透X線的結(jié)石。對(duì)膽囊炎。膽道炎及消化不良亦有一對(duì)療效。

5.鑒別：
    (1)取本品10mg，加硫酸1ml與甲醛1滴使溶解，放置5分鐘后，再加水5ml，生成藍(lán)綠色懸浮物。
　　(2)本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致。

6.熊去氧膽酸(128-13-2)的檢查：
    (1)異臭：
    取本品2.0g，加水100ml，煮沸2分鐘，應(yīng)無(wú)臭。

　　(2)氯化物：
    取本品1.0g，加冰醋酸10ml，振搖使溶解，加水稀釋至100ml，搖勻，放置10分鐘，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml，依法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0ml制成的對(duì)照液比較，不得更濃(0.02%)。

　　(3)硫酸鹽：
    取上述氯化物項(xiàng)下剩余的濾液40ml，依法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2.0ml制成的對(duì)照液比較，不得更濃(0.05%)。

　　(4)有關(guān)物質(zhì)：
    取本品，加氯仿-乙醇(9:1)制成每1ml中含1.0mg的溶液，作為供試品溶液；另取鵝去氧膽酸對(duì)照品，加氯仿-乙醇(9:1)制成每1ml中含15μg的溶液，作為對(duì)照品溶液(1)；再取膽石酸對(duì)照品，加氯仿-乙醇(9:1)制成每1ml中含1.0μg的溶液，作為對(duì)照品溶液(2)。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠Ｇ薄層板上，以氯仿-丙酮-冰醋酸(7:2:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，晾干，于120℃加熱30分鐘，噴以20%磷鉬酸的乙醇溶液，再在120℃加熱2～3分鐘，立即檢視。供試品溶液如顯與對(duì)照品溶液(1)相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液(1)的主斑點(diǎn)比較，不得深；如顯其他雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液(2)所顯的主斑點(diǎn)比較，不得更深。
 
　　(5)干燥失重：
    取本品，在105℃干燥2小時(shí)，減失重量不得過(guò)1.0%。

　　(6)熾灼殘?jiān)��?BR>    取本品1.0g，依法檢查，遺留殘?jiān)�不得過(guò)0.2%。
 
　　(7)鋇鹽：
    取異臭項(xiàng)下的溶液，加鹽酸2ml，煮沸2分鐘，放冷，濾過(guò)，并用水洗滌，洗液與濾液合并使成100ml，搖勻；取10ml，加稀硫酸1ml，不得發(fā)生渾濁。
 
　　(8)重金屬：
    取熾灼殘?jiān)��?xiàng)下遺留的殘?jiān)�，依法檢查，含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。

　　(9)砷鹽：
    取本品1.0g，加水23ml溶解后，加鹽酸5ml，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定(0.0002%)。

7.含量測(cè)定：
    取本品約0.5g，精密稱定，加中性乙醇(對(duì)酚酞指示液顯中性)40ml與新沸過(guò)的冷水20ml，溶解后，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加新沸過(guò)的冷水100ml，繼續(xù)滴定至終點(diǎn)。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于39.26mg的C₂₄H₄₀O₄。

8.用法用量：
　　膽固醇性膽結(jié)石10 mg/kg體重/日。結(jié)石必須是X射線能穿透的，同時(shí)膽囊收縮功能須正常。原發(fā)性膽汁淤積性肝硬變，原發(fā)性硬化性膽管炎15mg/kg體重/日。膽汁返流性胃炎250mg/日，睡前服。
 
9.不良反應(yīng)：
　　治療期可引起膽結(jié)石鈣化，軟便。

10.禁忌癥：
　　急性膽系感染、膽道梗阻、孕婦及哺乳期婦女。

11.藥物相互作用：
　　與消膽胺、考來(lái)替泊及含氫氧化鋁的抗酸劑合用可致本藥吸收減少。

　　本品(3α,7β-二羥基-5β-膽烷酸，UDCA)是一種二羥基膽酸，在人類總膽汁中占3%。最早由日本岡山大學(xué)的Shoda從中國(guó)熊膽汁中分離而命名，1985年Leuschner等用其治療合并肝炎的膽結(jié)石時(shí)發(fā)現(xiàn)血清轉(zhuǎn)氨酶降低，此后大量臨床研究也證實(shí)了UDCA對(duì)一些肝病有確切的治療作用。現(xiàn)將其治療肝病的作用機(jī)制及療效簡(jiǎn)介如下：

    (1)作用機(jī)制：
　　膽汁淤積性肝病與鵝去氧膽酸、去氧膽酸和石膽酸的積聚有關(guān)，這些膽酸由于去垢作用而引起肝細(xì)胞損害。UDCA是一種無(wú)毒性的親水膽酸，能競(jìng)爭(zhēng)性地抑制毒性內(nèi)源性膽酸在回腸的吸收。通過(guò)激活鈣離子、蛋白激酶C組成的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，并通過(guò)激活分裂活性蛋白激酶來(lái)增強(qiáng)膽汁淤積肝細(xì)胞的分泌能力，使血液及肝細(xì)胞中內(nèi)源性疏水膽酸濃度降低，達(dá)到抗膽汁淤積的作用。UDCA還能競(jìng)爭(zhēng)性地取代細(xì)胞膜和細(xì)胞器上的毒性膽酸分子，防止肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞受到更多毒性膽酸的損害。

    上述作用具體表現(xiàn)在：
    (1)細(xì)胞保護(hù)作用。UDCA結(jié)合物能明顯減輕疏水膽酸誘發(fā)的肝細(xì)胞的細(xì)胞溶解，減少培養(yǎng)鼠和人類肝細(xì)胞由毒性膽酸誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。
    (2)膜穩(wěn)定作用。UDCA可防止膽酸誘發(fā)的腺粒體膜滲透性改變，也就是說(shuō)可通過(guò)膜穩(wěn)定作用來(lái)防止毒性膽酸誘發(fā)的腺粒體膜、基底膜和小膽管膜損害。
    (3)抗氧化作用。UDCA能抑制毒性膽酸引起的枯否細(xì)胞激活，還能增加肝細(xì)胞谷胱甘肽和含硫醇蛋白的水平，防止肝細(xì)胞的氧化損傷。
    (4)免疫調(diào)節(jié)作用。UDCA通過(guò)降低疏水膽酸的刺激作用間接抑制，并通過(guò)激活糖皮質(zhì)激素受體直接抑制組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅰ類和Ⅱ類基因的表達(dá)。

    (2)臨床應(yīng)用：
　　原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)。PBC是主要發(fā)生于中年婦女的慢性進(jìn)行性膽汁淤積性肝病，可能與免疫因素有關(guān)。Pares等進(jìn)行了一項(xiàng)試驗(yàn)，平均活組織檢查間隔時(shí)間為4.5年。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UDCA確能防止PBC組織學(xué)分期的進(jìn)展。1999年Angulo等報(bào)道，在一項(xiàng)UDCA對(duì)非肝硬化PBC患者的長(zhǎng)期治療試驗(yàn)(平均6.6年)中，與接受無(wú)效治療組患者相比，治療組發(fā)生肝硬化的時(shí)間推遲。在大多數(shù)的UDCA治療試驗(yàn)中，所用劑量為每日13～15毫克/千克。最近的兩項(xiàng)旨在探討UDCA合適劑量的研究發(fā)現(xiàn)，每日13～15毫克/千克和20～25毫克/千克的劑量療效均優(yōu)于每日10～15毫克/千克或以下。UDCA與甲氨喋呤或秋水堿聯(lián)合治療PBC的療效并不優(yōu)于單用UDCA；但與潑尼松或潑尼松加硫唑嘌呤合用，其改善炎癥的療效顯著優(yōu)于單用UDCA。

　　原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)。PSC為一種罕見(jiàn)的膽汁淤積性疾病，表現(xiàn)為肝內(nèi)外膽管狹窄和擴(kuò)張。最近的一項(xiàng)由105例患者組成，治療時(shí)間平均為2.2年的前瞻性隨機(jī)安慰劑對(duì)照試驗(yàn)(UDCA每日13～15毫克/千克)顯示，患者的生化指標(biāo)顯著改善，臨床癥狀和肝組織學(xué)均無(wú)顯著變化。但對(duì)于明顯的膽管狹窄，在內(nèi)鏡治療的同時(shí)加用UDCA可以改善患者的預(yù)后。

　　妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)。ICP常發(fā)生于妊娠晚期，主要癥狀為，孕婦出現(xiàn)瘙癢、黃疸，可致早產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等并發(fā)癥。目前認(rèn)為是在遺傳的基礎(chǔ)上，與體內(nèi)雌激素升高有關(guān)。一項(xiàng)UDCA治療IPC的隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)包括15例患者，治療組瘙癢和肝生化指標(biāo)有改善，8例孕婦(接受UDCA1.0克/天)在或近預(yù)產(chǎn)期分娩；而用安慰劑治療的7例孕婦中有5例在孕36周分娩，其中1例為死胎。治療期間未見(jiàn)母、嬰副作用發(fā)生。因此，UDCA治療ICP似乎是有效安全的。

　　膽囊纖維化肝病(CF)。Colom鄄bo等在一項(xiàng)包括55例患者的隨訪雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)中，將UDCA治療(每日15毫克/千克)1年后與安慰劑組進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，治療組癥狀、營(yíng)養(yǎng)情況、生化指標(biāo)等均顯著改善。VandeMeeberg和SulliVan等報(bào)道，較高劑量UDCA(每日20毫克/千克)的療效優(yōu)于較低劑量(每日5～15毫克/千克)。

　　慢性丙型肝炎。2001年有幾項(xiàng)UDCA聯(lián)合α-干擾素治療慢性丙型肝炎的隨機(jī)安慰劑對(duì)照試驗(yàn)報(bào)道，治療后生化指標(biāo)改善，但對(duì)丙肝病毒(HCV)-RNA的清除無(wú)效，肝組織學(xué)特征也無(wú)改變。

　　其他。有研究顯示，UDCA與環(huán)孢素A及甲氨喋呤合用治療異型骨髓移植，UDCA能防止靜脈閉塞和急性移植物抗宿主病的發(fā)生。每日15毫克/千克的UDCA可改善進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥、膽管閉鎖以及全胃腸外營(yíng)養(yǎng)相關(guān)肝病的膽汁淤積癥狀及生化指標(biāo)。UDCA用于治療其他肝病的研究也已開(kāi)展，如酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、良性復(fù)發(fā)性肝內(nèi)膽汁淤積癥、先天性肝內(nèi)膽管囊性擴(kuò)張癥、自身免疫性肝炎和急性肝炎等，其療效均有待進(jìn)一步評(píng)價(jià)。

12.貯藏：
    遮光，密閉保存。